Real time rt pcr là gì? Các công bố khoa học về Real time rt pcr
Real-time RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) là một phương pháp phân tích gene và xác định mức độ biểu hiện gen hiện tại trong một mẫu. Nó...
Real-time RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) là một phương pháp phân tích gene và xác định mức độ biểu hiện gen hiện tại trong một mẫu. Nó kết hợp hai kỹ thuật khác nhau - RT (đảo ngược chuyển) và PCR (Phản ứng chuỗi Polymerase) để phục vụ cho mục đích phân tích và đo lường mức độ biểu hiện gen một cách cụ thể.
Trong quá trình Real-time RT-PCR, RNA môi trường được chuyển thành DNA sử dụng enzyme reverse transcriptase. Sau đó, DNA này được nhân bản hàng triệu lần bằng PCR sử dụng primer đặcif để tạo ra số lượng lớn các đoạn cDNA. Quá trình PCR được theo dõi trực tiếp trong thời gian thực từng vòng, và kết quả đo lường được hiển thị ngay sau mỗi vòng PCR.
Real-time RT-PCR cung cấp thông tin về mức độ biểu hiện gen hiện tại trong một mẫu và cung cấp sự đo lường chuẩn xác và nhạy cảm. Phương pháp này được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu di truyền, y học, và sinh học phân tử để xác định mức độ biểu hiện gen trong các mẫu nghiên cứu.
Real-time RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) là một phương pháp phân tích gen dựa trên sự kết hợp giữa reverse transcription (RT) và polymerase chain reaction (PCR). Phương pháp này được sử dụng để phân tích và đo lường mức độ biểu hiện gen một cách định lượng và cung cấp thông tin về số lượng gen hiện tại trong một mẫu xác định.
Quá trình Real-time RT-PCR bao gồm các bước sau:
1. Chuẩn bị mẫu: RNA được trích xuất từ mẫu mô hoặc tế bào. RNA này chứa thông tin di truyền từ gen mục tiêu cần phân tích.
2. Reverse transcription (RT): RNA môi trường được chuyển đổi thành cDNA (Complementary DNA) bằng cách sử dụng enzyme reverse transcriptase. Các nucleotide có thể được sử dụng để đánh dấu cDNA để thuận tiện cho việc thu thập dữ liệu.
3. PCR amplification: Sự nhân đôi cDNA được thực hiện bằng cách sử dụng enzyme polymerase và các primer (một cặp primer ngược và tiến) nhằm nhân bản đoạn gen mục tiêu. Vòng lặp này sẽ làm tăng lượng gen mục tiêu tạo ra.
4. Detection: Trong quá trình PCR, một fluorochrome đặc biệt (như SYBR Green hoặc TaqMan probe) được sử dụng để theo dõi sự gia tăng lượng gen theo thời gian. Mỗi lần quá trình PCR hoàn tất, hàm lượng fluorochrome được đo lường và xác định sự tăng trưởng gen.
5. Analysis: Sử dụng các phần mềm phân tích đặc biệt, kết quả dữ liệu thu được từ quá trình PCR được phân tích và biểu đồ hoá. Mức độ biểu hiện gen trong mẫu được xác định dựa trên tham số như quãng thời gian tăng trưởng (Ct), tương ứng với số vòng PCR cần thiết để đạt được ngưỡng nhất định của gen mục tiêu.
Real-time RT-PCR cho phép người ta giám sát và đo lường mức độ biểu hiện gen một cách chính xác và nhạy cảm. Nó được sử dụng trong nhiều lĩnh vực như nghiên cứu di truyền, sinh học phân tử, y học dự đoán và xác định chẩn đoán.
Danh sách công bố khoa học về chủ đề "real time rt pcr":
Trong bối cảnh dịch bùng phát liên tục của coronavirus mới xuất hiện gần đây (2019-nCoV), các phòng thí nghiệm y tế công cộng đang gặp phải thách thức do chưa có được các mẫu virus cách ly, trong khi ngày càng có nhiều bằng chứng cho thấy dịch bệnh lan rộng hơn so với dự đoán ban đầu và sự lây lan quốc tế qua khách du lịch đang xảy ra.
Chúng tôi đặt mục tiêu phát triển và triển khai một phương pháp chẩn đoán mạnh mẽ để sử dụng trong môi trường phòng thí nghiệm y tế công cộng mà không cần có sẵn mẫu virus thực tế.
Chúng tôi trình bày một quy trình chẩn đoán được xác thực cho 2019-nCoV, với thiết kế dựa trên quan hệ gen gần gũi của 2019-nCoV với coronavirus SARS, tận dụng công nghệ axit nucleic tổng hợp.
Quy trình này phát hiện chính xác 2019-nCoV và phân biệt 2019-nCoV với SARS-CoV. Thông qua sự phối hợp giữa các phòng thí nghiệm học thuật và công lập, chúng tôi đã xác nhận tính độc quyền của kết quả thử nghiệm dựa trên 297 mẫu lâm sàng gốc có chứa đầy đủ phổ virus đường hô hấp ở người. Vật liệu kiểm soát được cung cấp thông qua European Virus Archive – Global (EVAg), một dự án cơ sở hạ tầng của Liên minh Châu Âu.
Nghiên cứu hiện tại chứng minh năng lực phản ứng mạnh mẽ đạt được thông qua sự phối hợp giữa các phòng thí nghiệm học thuật và công lập trong các mạng lưới nghiên cứu quốc gia và châu Âu.
Phương pháp PCR Ngược Dòng Thời gian Thực dựa trên huỳnh quang (RT-PCR) được sử dụng rộng rãi để định lượng mức mRNA ở trạng thái ổn định và là một công cụ quan trọng cho nghiên cứu cơ bản, y học phân tử và công nghệ sinh học. Các thử nghiệm dễ tiến hành, có khả năng xử lý khối lượng lớn, và có thể kết hợp độ nhạy cao với độ đặc hiệu đáng tin cậy. Công nghệ này đang tiến hóa nhanh chóng với sự xuất hiện của các enzym, hóa chất và thiết bị mới. Tuy nhiên, mặc dù RT-PCR thời gian thực đã giải quyết nhiều khó khăn vốn có trong RT-PCR thông thường, nó đã trở nên ngày càng rõ ràng rằng nó tạo ra những vấn đề mới cần giải quyết cấp thiết. Do đó, bên cạnh việc cung cấp bức tranh tổng thể về công nghệ RT-PCR thời gian thực, bài đánh giá này còn có mục tiêu bổ sung: sẽ mô tả và thảo luận cụ thể một số vấn đề liên quan đến việc giải thích các kết quả có tính chất số học và dễ dàng phân tích thống kê, nhưng độ chính xác của chúng bị ảnh hưởng đáng kể bởi sự biến đổi của hóa chất và người điều hành.
RT-PCR thời gian thực là phương pháp được khuyến nghị cho phân tích biểu hiện gen định lượng. Một bước bắt buộc là chọn các gen tham chiếu tốt để chuẩn hóa. Một vài gen thường được gọi là gen HouseKeeping (HSK), chẳng hạn như
Từ các tập dữ liệu vi điều hòa công khai, chúng tôi đã chọn các gen tham chiếu tiềm năng mà biểu hiện của chúng rõ ràng vẫn không thay đổi trong quá trình phát triển lâu dài trên glucose. Sử dụng thuật toán geNorm,
Trong công việc này, chúng tôi đã cung cấp một tập hợp các gen phù hợp làm gen tham chiếu cho phân tích biểu hiện gen định lượng bằng RT-PCR thời gian thực trên các mẫu sinh học men bao gồm một bảng lớn các trạng thái sinh lý. Ngược lại, chúng tôi đã không xác nhận và không khuyến khích việc sử dụng
Phản ứng chuỗi polymerase (RT–PCR) trong thời gian thực là phương pháp được lựa chọn để đo lường nhanh chóng và tái sản xuất được nồng độ biểu hiện của cytokine hoặc yếu tố tăng trưởng trong các mẫu nhỏ. Các phương pháp phát hiện huỳnh quang để theo dõi PCR trong thời gian thực bao gồm các mồi huỳnh quang được gán nhãn với thuốc nhuộm báo cáo và thuốc nhuộm quenching, chẳng hạn như các mồi Taqman hoặc Molecular Beacons, và thuốc nhuộm liên kết dsDNA SYBR Green I. Mồi huỳnh quang (Taqman) cho một loạt cytokine và yếu tố tăng trưởng của người và chuột đã được kiểm tra về độ nhạy và so với một phép đo định lượng bằng SYBR Green I sử dụng theo dõi huỳnh quang thời gian thực (Máy phát hiện tuần tự Model 7700 của PE Applied Biosystems). Phép phát hiện SYBR Green I liên quan đến việc phân tích nhiệt độ nóng chảy của sản phẩm PCR và đo lường huỳnh quang ở nhiệt độ tối ưu. Các mồi huỳnh quang cung cấp khả năng phát hiện nhạy và tái lặp của các mục tiêu dao động từ biểu hiện thấp (<10 bản sao/phản ứng) đến cao (>107 bản sao/phản ứng). SYBR Green I cho ra kết quả định lượng tái lặp khi gen mục tiêu được biểu hiện ở mức độ trung bình đến cao (≥1000 bản sao/phản ứng), nhưng không cho ra kết quả định lượng tái lập một cách nhất quán khi gen mục tiêu được biểu hiện ở mức độ thấp. Mặc dù tối ưu hóa nhiệt độ nóng chảy cải thiện tính đặc hiệu của phép phát hiện SYBR Green I, nhưng trong tay chúng tôi, nó không bằng độ nhạy và tính đặc hiệu lặp lại của các mồi huỳnh quang. Phương pháp sau là lựa chọn đầu tiên cho việc đo lường biểu hiện gen ở mức độ thấp, mặc dù SYBR Green I là phương pháp đơn giản và tái lặp để định lượng các gen được biểu hiện ở mức độ trung bình đến cao.
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
- 10